導(dǎo)語(yǔ)：糖尿病血管細(xì)胞核增殖分析論文一文來(lái)源于網(wǎng)友上傳，不代表本站觀點(diǎn)，若需要原創(chuàng)文章可咨詢客服老師，歡迎參考。

論文關(guān)鍵詞糖尿病足中醫(yī)證型脛后動(dòng)脈血管細(xì)胞核增殖相關(guān)抗原臨床研究

論文摘要目的：探討糖尿病足中醫(yī)辨證分型與血管細(xì)胞核增殖相關(guān)抗原的表達(dá)差異。方法：對(duì)32例截肢的糖尿病足患者按中醫(yī)辨證分為氣血兩虛瘀阻證、脈絡(luò)瘀熱證、脈絡(luò)熱毒證和氣陰兩虛瘀阻證，分別對(duì)其截肢肢體的脛后動(dòng)脈應(yīng)用免疫組化法對(duì)細(xì)胞核增殖相關(guān)抗原（Ki67）的表達(dá)進(jìn)行觀察、分析。結(jié)果：Ki67的陽(yáng)性表達(dá)與糖尿病足動(dòng)脈硬化閉塞程度呈負(fù)相關(guān)，與血管炎癥病變程度呈正相關(guān)。結(jié)論：炎癥在糖尿癥的大血管病變的過(guò)程中起到了重要的作用。

糠尿病足是糖尿病的嚴(yán)重并發(fā)癥，據(jù)統(tǒng)計(jì)1996年全球糖尿病患者1．2億，預(yù)計(jì)到2025年，將達(dá)到2．5億以上，而大約15％的糖尿病患者將在其生活的某一時(shí)間發(fā)生足潰瘍或壞疽[1]。目前對(duì)于糖尿病足病因及發(fā)病機(jī)制雖然還不是完全清楚，但大家公認(rèn)糖尿病合并大血管病變導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化是糖尿病足發(fā)病的最主要因素?，F(xiàn)將2004年10月～2005年5月間我們收治的32例糖尿病足患者的截肢動(dòng)脈標(biāo)本的血管細(xì)胞核增殖相關(guān)抗原(Ki67)與其中醫(yī)辨證分型的相關(guān)性研究情況報(bào)告如下。

1臨床資料

1．1一般資料：32例均為天津醫(yī)科大學(xué)代謝病醫(yī)院和天津中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院2004年10月～2005年5月間的住院患者，其中男性24例，女性8例；年齡50～86歲，平均年齡69．2歲；糖尿病病程最長(zhǎng)30年，最短6年，平均18±2．4年。

1．2診斷標(biāo)準(zhǔn)：糖尿病足的診斷標(biāo)準(zhǔn)采用2000年中華醫(yī)學(xué)會(huì)糖尿病學(xué)會(huì)第二屆糖尿病足會(huì)議所制訂的“糖尿病足(肢端壞疽)檢查方法及診斷標(biāo)準(zhǔn)”。

1．3截肢標(biāo)準(zhǔn)：參照國(guó)際糖尿病足工作組編寫的《糖尿病足國(guó)際共識(shí)》中關(guān)于“大截肢的定義、標(biāo)準(zhǔn)和指標(biāo)”[2]執(zhí)行。

1．4中醫(yī)辨證分型標(biāo)準(zhǔn)：參照《中醫(yī)外科學(xué)(第七版)》及《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則·脫疽》之中醫(yī)辨證分型方案分為氣陰兩虛瘀阻證、脈絡(luò)瘀熱證、氣血兩虛瘀阻證、脈絡(luò)熱毒證四型。

2觀察方法

2．1標(biāo)本取材：壞疽截肢標(biāo)本32例，其中按中醫(yī)辨證分型氣血兩虛瘀阻組10例，脈絡(luò)瘀熱組10例，氣陰兩虛瘀阻組4例，脈絡(luò)熱毒組8例，取各例標(biāo)本下肢脛后動(dòng)脈。標(biāo)本經(jīng)過(guò)10％福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，備用。

2．2設(shè)備、試劑：美國(guó)PENGUIN-600CL自動(dòng)圖像分析系統(tǒng)，細(xì)胞核增殖相關(guān)抗原(Ki67)抗體PV9000試劑盒DAB購(gòu)于北京中山生物技術(shù)有限公司。

2．3免疫組織化學(xué)法：標(biāo)本常規(guī)石蠟包埋，4μm連續(xù)切片，采用PV法進(jìn)行免疫組化染色，染色過(guò)程嚴(yán)格按試劑盒染色程序進(jìn)行，選取已知的陽(yáng)性切片作陽(yáng)性對(duì)照，PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。觀察細(xì)胞核增殖相關(guān)抗原(Ki67)，陽(yáng)性物質(zhì)呈棕黃色細(xì)顆粒狀于細(xì)胞核表達(dá)，采用美國(guó)PENGUIN-600CL圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行圖像分析，選取病變處每500個(gè)細(xì)胞Ki67的陽(yáng)性表達(dá)率作為其陽(yáng)性表達(dá)指數(shù)。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS10．0軟件包進(jìn)行方差分析。

3結(jié)果

3．1中醫(yī)各證型所占比例以及年齡、性別分布：各證型比例，氣血兩虛瘀阻組10例（31．25%），脈絡(luò)瘀熱組10

例（31．25%），氣陰兩虛瘀阻組4例（12．5%），脈絡(luò)熱毒組8例（25．0%）。年齡、性別分布情況，見表1。

表132例患者年齡、性別分布n（%）

性別n50~60歲61~70歲71~80歲80歲以上男24（75．0）4（12．5）8（25．0）11（34．4）1（3．1）女8（25．0）1（3．1）3（9．3）4（12．5）0總計(jì)32（100．0）5（15．6）11（34．4）15（46．9）1（3．1）3．2免疫組織化學(xué)法觀察各證型Ki67表達(dá)差異：具體情況見表2。

表2各證型Ki67陽(yáng)性表達(dá)指數(shù)比較（%）

證型Ki67陽(yáng)性表達(dá)指數(shù)脈絡(luò)熱毒4．87±1．01*氣陰兩虛瘀阻1．86±0．47脈絡(luò)瘀熱1．49±0．13氣血兩虛瘀阻0．30±0．18注：與氣血兩虛瘀阻型比較，*P<0．05。

氣血兩虛瘀阻證、脈絡(luò)熱毒證、脈絡(luò)瘀熱證、氣陰兩虛瘀阻證中均可見部分細(xì)胞Ki67呈陽(yáng)性表達(dá)，在脈絡(luò)熱毒證中表達(dá)指數(shù)最高，氣血兩虛瘀阻證中表達(dá)指數(shù)最低，二者比較具有顯著性差異(P<0．05)。

4討論

Ki67抗原為細(xì)胞核內(nèi)與細(xì)胞分裂增殖相關(guān)的蛋白抗原，分子量為345kd和395kd，其編碼基因位于第10號(hào)染色體上。Ki67的表達(dá)出現(xiàn)于G1中期到晚期，S期和G2期逐漸增加，有絲分裂期達(dá)高峰，分裂后迅速降解或丟失抗原決定簇，到G0期則不表達(dá)，半衰期為lh或更短[3]。有人認(rèn)為它可能是具有蛋白結(jié)合特性的重要結(jié)構(gòu)，在有絲分裂中起著維持DNA規(guī)則結(jié)構(gòu)的重要作用[4]，是一個(gè)反映細(xì)胞增殖的敏感指標(biāo)。

在糖尿病足的不同辨證分型中氣血兩虛瘀阻證、脈絡(luò)熱毒證、脈絡(luò)瘀熱證、氣陰兩虛瘀阻證中Ki67表達(dá)均呈陽(yáng)性，在脈絡(luò)熱毒證中表達(dá)最強(qiáng)、氣血兩虛瘀阻證中表達(dá)最弱，二者相比具有顯著性差異(P＜0．05)。根據(jù)Ki67陽(yáng)性指數(shù)可以判斷細(xì)胞增殖的活性，指明細(xì)胞增殖與糖尿病足動(dòng)脈病變的關(guān)系。在糖尿病足的不同辨證分型中動(dòng)脈的硬化閉塞程度由輕到重依次是脈絡(luò)熱毒證、氣陰兩虛瘀阻證、脈絡(luò)瘀熱證、氣血兩虛瘀阻證。Ki67的陽(yáng)性表達(dá)與糖尿病足動(dòng)脈硬化閉塞程度呈負(fù)相關(guān)。而在通過(guò)對(duì)32例糖尿病足截肢的動(dòng)脈進(jìn)行病理學(xué)觀察的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)糖尿病足血管病變主要體現(xiàn)在中動(dòng)脈的病理學(xué)變化，其中脈絡(luò)熱毒、氣陰兩虛瘀阻兩證型以動(dòng)脈周圍及全層的炎癥性改變?yōu)橹?；脈絡(luò)瘀熱、氣血兩虛瘀阻證以中膜鈣化、平滑肌細(xì)胞萎縮、變性、壞死及膠原纖維增多及內(nèi)膜粥樣斑塊形成為主，炎癥表現(xiàn)不明顯；而Ki67的陽(yáng)性指數(shù)與血管炎癥病變程度呈正相關(guān)。這說(shuō)明炎癥在糖尿病的大血管病變的過(guò)程中起了重要的作用，特別是在脈絡(luò)熱毒證、氣陰兩虛瘀阻證兩型，這對(duì)臨床具有重要的指導(dǎo)意義。

5參考文獻(xiàn)

1BoultonAJ.Thediabeticfoot：aglobalview.DiabetelMetabResRev，2000，16(1)：2．

2許樟榮，敬華．糖尿病足國(guó)際共識(shí)．中華糖尿病學(xué)會(huì)第二屆足病第一次足病研討會(huì)．2002，435．

3SchulterC，DuchrowM,WohlenbergC,etal．MolecularcloingofthecellproliferationassociatednuclearantigendefinedbyantibodyKi67：anuniquegeneencodingforanew，PESTprotein.CellBiol，1993，123(3)：513.

4NamitaS，PeterA．Ki67structurefunctionandnewantibodies.Pathol，1992，168：161．